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点点滴滴
前言
2023年6月21日，国家药品监督管理局药品审评中心发布了《抗体偶联药物药学研究与评价技术指导原则（征求意见稿）》，其中的质量研究与质量控制工艺相关杂质部分明确，应结合生产用原材料、生产工艺等鉴定潜在的工艺相关杂质并根据情况进行定性和/或定量研究，评估杂质残留的安全性风险，必要时将具有潜在安全性风险的杂质残留纳入质量标准进行控制。杂质残留可能包括有机溶剂、定点偶联酶（如适用）、元素杂质、偶联试剂（如适用）等。
定点偶联技术中，酶法偶联具有高特异性和高效性，具备定点偶联的优势。但是，引入额外蛋白有可能造成免疫原性的潜在风险，因此需要建立一套准确、可靠的方法用于抗体偶联药物（ADC）中定点偶联酶的残留。
1、常见的定点偶联酶有哪些？
常见的定点偶联酶有法尼基转移酶（FT）、甲酰甘氨酸生成酶（FGE）、微生物谷氨酰胺转胺酶（MTG）、转肽酶（Sortase）、络氨酸酶、唾液酸转移酶（Sta）、内糖苷酶（EndoS）、半乳糖转移酶（CgtB）等。
2、为什么要做酶残留检测？
对于酶法偶联，在ADC工艺生产过程中不可避免地会外源引入酶蛋白等工艺相关杂质，可能带来免疫原性的风险，尽管后期会进行纯化、超滤、溶液置换等操作，但也很难保障该工艺杂质不会对ADC药物带来安全性的影响。
根据产品源于设计理念，虽然ADC工艺生产已将该酶降低至一个很低的水平，但仍需要通过相关的方法验证及检测，以证明该工艺相关杂质得到有效控制或去除，并达到可接受的水平，从而保证产品的安全性。
3、方法原理是什么？
微谱采用的是定量肽质谱法（内标定量），该方法采用特征肽段质谱定量的原理，在痕量蛋白残留检测中具有专属性强，且受抗体蛋白干扰较小。原理是样品中的酶蛋白经蛋白酶酶解成多肽，然后选择酶蛋白特征肽段为检测对象，特征肽段于目标蛋白一一对应，用特征肽段来表征目标蛋白质；合成与特征肽段序列相同的同位素标记肽段作为内标，利用同位素稀释法测定目标蛋白特征肽段的含量，从而计算出目标蛋白的含量。
4、方案优势有哪些？
定量肽质谱法检测蛋白残留适用于：
1）定量肽质谱法（内标定量）相比外标法定量抗基质干扰能力强，在准确定量上更有优势。
2）没有商品化的ELISA试剂盒的蛋白残留检测，相比于定制试剂盒，周期更短。
3）样品中有大量类似蛋白干扰时，相较于ELISA法，定量肽质谱法特异性更高，准确度更好。
5、实验流程怎么做？
实验流程图
微谱开发的基于定量肽质谱法定点偶联酶检测方法，灵敏度可达到1pmol，专属性见下图：
代表性图谱
标准曲线
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